慢病毒載體(Lentiviral vector)較逆轉(zhuǎn)錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細(xì)胞。慢病毒載體能夠產(chǎn)生表達(dá)siRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細(xì)胞、干細(xì)胞、受精卵以及分化的后代細(xì)胞中表達(dá)siRNA/miRNA,實(shí)現(xiàn)在多種類(lèi)型的細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達(dá)的功能性沉默，為在原代的人和動(dòng)物細(xì)胞組織中快速研究基因功能，以及產(chǎn)生特定基因表達(dá)降低的動(dòng)物提供了可能性。
 

　　VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系 CL110001制備：
 

　　細(xì)胞：慢病毒包裝常用人胚腎細(xì)胞(HEK, human embryonic kidney)293  T，其含有SV40病毒的大T抗原蛋白編碼基因，轉(zhuǎn)染效率高。但其貼壁性不好，所以需要使用多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)皿增加其吸附性。多聚賴氨酸培養(yǎng)皿可購(gòu)買(mǎi)，也可自行制備。轉(zhuǎn)染前，細(xì)胞密度控制在40-70%比較好。
 

　　DNA：每10 cm培養(yǎng)皿約含5x106 293T細(xì)胞，需用30-40 ug不含內(nèi)毒素的質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染。質(zhì)粒的純度對(duì)慢病毒載體的包裝效率非常關(guān)鍵。不同的包膜蛋白表達(dá)載體，其使用量也不同。
 

　　轉(zhuǎn)染：經(jīng)濟(jì)的轉(zhuǎn)染方法是磷酸鈣轉(zhuǎn)染法，雖然其溶液配置影響因素多，不易穩(wěn)定重復(fù)得到轉(zhuǎn)染結(jié)果。其它方法有脂質(zhì)體法和PEI法。轉(zhuǎn)染48-60后可以收集上清，通過(guò)低速離心，然后濾膜過(guò)濾可以去除上清中的細(xì)胞碎片。
 

　　如果使用VSV-G包膜蛋白的話，可以通過(guò)兩次超速離心進(jìn)行濃縮，從而可以獲得滴度高達(dá)1011-1012IU/ml的慢病毒載體。之后可以將病毒載體溶解在PBS， HBSS或者DMEM中，并置于-800C儲(chǔ)存。
 

　　儲(chǔ)存溶液添加血清會(huì)幫助提高病毒凍融時(shí)的存活率，然而有些病毒在侵染細(xì)胞時(shí)，血清會(huì)有干擾，所以需要依據(jù)具體病毒種類(lèi)考慮是否添加血清。